病毒膜蛋白DNA疫苗對石斑魚SGIV感染的保護性免疫 |
| 出處：水生動物健康評估公眾號 作者：南湖意 水產養殖網 2019-12-06 20:52:00 |
論文解讀：Fish & Shellfish Immunology，病毒膜蛋白DNA疫苗對石斑魚SGIV感染的保護性免疫
新加坡石斑魚虹彩病毒（SGIV）是我國南方主要的石斑魚感染病毒。然而，目前尚無有效的方法來控制這種病毒性疾病。本研究將編碼病毒膜蛋白的SGIV-ORF19R（SGIV-19R）構建到pcDNA3.1-HA中，并用其對石斑魚的免疫保護作用進行評價。主要研究結果如下：
1.亞細胞定位顯示SGIV-19R分布于EPC細胞質內。
2. 共定位分析表明該蛋白部分與內質網（ER）共定位。
EGFP標記的SGIV-19R信號與ER特異性RFP信號部分重疊，在轉染后24和48小時的細胞融合通道中出現黃色熒光。然而，在細胞中沒有觀察到這樣線粒體或高爾基體被RFP標記的重疊（數據未顯示），SGIV-19R蛋白部分共定位于 EPC細胞中的ER。
3. SGIV-19R基因疫苗在石斑魚體內的表達
RT-PCR和Western blot分析證實了DNA疫苗pcDNA3.1-19R在接種石斑魚肌肉組織中表達SGIV-19R，且SGIV-19R的高表達水平與較高的接種劑量相關。
4. 免疫相關基因的轉錄水平
免疫石斑魚脾臟、肝臟和腎臟中腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細胞介素-1β（IL-1β）、Mx1和免疫球蛋白M（IgM）基因的轉錄水平顯著上調。
5. DNA疫苗的保護效果評價
為了檢驗疫苗的保護作用，石斑魚在15dpv時腹腔注射SGIV，在接種后21天內監測死亡率。如圖5所示，死亡首次記錄在6 dpi的 pcDNA3.1（C）組，隨后是8 dpipcDNA3.1-19R（L）組，接著是10dpi pcDNA3.1-19R（H）組。在45μg pcDNA3.1-19R的DNA劑量下，49.9%的魚的相對存活率顯著提高，而在90μg pcDNA3.1-19R的DNA劑量下，75.0%的魚的相對存活率顯著降低。這些數據表明適當劑量的pcDNA3.1-19R可作為一種有效的疫苗免疫石斑魚抗SGIV感染的研究。
6. SGIV病毒載量的檢測
qPCR法進一步檢測各組死亡和存活石斑魚脾臟SGIV病毒載量。如表3所示，存活石斑魚的病毒載量范圍較低，從1.32×101到1.21×102 copies/μg病毒DNA，當使用更多的DNA疫苗時病毒載量較少。相反，SGIV-19R表達組和載體表達組死亡石斑魚的脾組織中病毒DNA含量大于5.33×106 copies/μg。死亡石斑魚表現出典型的SGIV感染出血癥狀，而存活的石斑魚沒有表現出這些癥狀。SGIV攻擊后存活石斑魚脾臟病毒載量低。
總之，我們的研究結果表明，編碼SGIV-19R蛋白的DNA疫苗pcDNA3.1-19R能有效地保護石斑魚應對SGIV挑戰。此外，表達pcDNA3.1-19R基因可以增強石斑魚天然免疫反應和適應性免疫反應，這是對抗SGIV感染必不可少的。這些結果提示pcDNA3.1-19R可能是控制SGIV病的一種候選疫苗。
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